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結(jié)腸癌細胞培養(yǎng)操作步驟和注意事項

更新時間:2018-04-10      點擊次數(shù):3266
   結(jié)腸癌細胞是一種成團、貼壁生長的細胞,如果狀態(tài)好的情況下,生長非???,細胞形態(tài)是不太規(guī)則的三角形.在低濃度時,此細胞長梭型(不好描述),高濃度時長成一張地毯,后者才是狀態(tài)的。
  結(jié)腸癌細胞培養(yǎng)操作步驟:
  1.結(jié)腸癌細胞細胞用蓋片鑷將蓋玻片自75%乙醇中取出,用無菌絲綢布擦拭干凈,不要用紗布;
  2.將蓋玻片輕輕放入6孔培養(yǎng)板(每孔一片)或培養(yǎng)皿中(每個平皿可放置2-3片);
  3.在距離紫外燈直射范圍內(nèi)20-30 厘米處照射2-3小時;
  4.將經(jīng)過計數(shù)的細胞懸浮液移入培養(yǎng)板中,使蓋玻片*浸在培養(yǎng)液中;
  5.將培養(yǎng)板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天,當貼壁細胞生長至覆蓋培養(yǎng)板底部2/3面積時,將培養(yǎng)板取出,用蓋片鑷輕輕取出蓋玻片,用蒸餾水漂洗后即可進行快速固定以及免疫細胞化學檢測。
  結(jié)腸癌細胞注意事項:
  1、觀察細胞在低倍鏡(4或5X物鏡)下進行,否則不能準確判斷細胞的傳代密度??醇毎男螒B(tài)請在10X或20X物鏡下。
  2、瓶中運輸培養(yǎng)基不能重復再用,請換用加雙抗的新培養(yǎng)基,細胞凍存后,培養(yǎng)基中可不加任何抗生素。
  3、有些細胞貼壁不牢,如發(fā)現(xiàn)貼壁細胞有脫落,可離心吹打后接種到新瓶內(nèi)。
  4、收到細胞后,若發(fā)現(xiàn)培養(yǎng)瓶破損、有液溢出及細胞有污染,請及時與我們。
  結(jié)腸癌細胞凍存和復蘇實驗原理:細胞凍存及復蘇的基本原則是慢凍快融,實驗證明這樣可以zui大限度的保存細胞活力。目前細胞凍存多采用甘油或二甲基亞砜作保護劑,這兩種物質(zhì)能提高細胞膜對水的通透性,加上緩慢冷凍可使細胞內(nèi)的水分滲出細胞外,減少細胞內(nèi)冰晶的形成,從而減少由于冰晶形成造成的細胞損傷。復蘇細胞應采用快速融化的方法,這樣可以保證細胞外結(jié)晶在很短的時間內(nèi)即融化,避免由于緩慢融化使水分滲入細胞內(nèi)形成胞內(nèi)再結(jié)晶對細胞造成損傷。
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